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学霸的超基因系统

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第二十四章 第一课(中)(2 / 2)
 “卧槽!兄弟你自求多福吧!”王青松把脸捂住,不敢看了。

    只见李骁拿起粉笔,微微沉思了一下,提笔唰唰就在黑板上疾书——

    (1)为了筛选目的基因有必要将重组子涂布在琼脂培养基上,只有重组子能够生长而其他的不生长。因此获得的唯一菌落就是由含有目的重组DNA分子细胞构成的菌落。

    (2)直接选择最简单的例子是目的基因专一对抗生素有抗性。作为一个例子,我们设计一个实验来从质粒R6-5克隆卡那霉素抗性基因。

    (3)该质粒携带有四个抗生素抗性基因,分别能对卡那霉素、氯霉素、链霉素和磺胺类药物产生抗性。卡那霉素抗性基因位于13个EcoRI片段中的一个片段。要克隆此基因,R6-5质粒的EcoRI内切酶片段要插入到某一载体(例如pBR322)的EcoRI位点上。连接混合物由13个不同重组DNA分子的多个拷贝组成。其中一个是携带卡那霉素抗性基因。

    (4)克隆的基因可以作为选择标记。

    (5)转化子涂布在含卡那霉素的琼脂板上,唯一能生存并形成菌落的细胞是包含被克隆的卡那霉素抗性基因的重组子。